荧光分光光度计
//日立F-7000荧光分光光度计
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今天，小手给大家带来的是日立F-7000荧光分光光度计的使用说明。这是我们分析化学专业学生使用最为广泛的仪器之一。
在操作过程中要注意使用规范及注意事项，比如拿取比色皿时手切忌接触光学面、比色皿不可用碱液洗涤等，并在实验结束后做好登记和收尾工作。
视频制作：杨健宇
摄像：王晓燕
下面是本教程滴文字版哦
荧光分光光度计的工作原理
由光源（高压汞灯或氙灯）发出的紫外光和蓝紫光经单色器（滤光片）处理后特定波长的光照射到样品池中，激发样品中的荧光物质而发出荧光，荧光经过滤过和反射后，光信号被光电倍增管放大后，然后以图或数字的形式在控制软件上显示出来（图２）。不同物质由于分子结构的不同，其激发态能级的分布具有各自不同的特征，
各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱，因此可以用荧光化合物的该特征来进行物质的定性鉴定。
荧光分光光度计的构造
1）光源
为了便于选择激发光的波长，要求激发光源是能够在很宽的波长范围内发光的连续光源。在紫外－可见光区，荧光光谱仪的光源常用氙弧灯。高压泵灯是线性光源，可以发出313、365、405、436和546 nm的光，也是较常用的荧光光源。
2）样品池
荧光仪用的样品池材料要求无荧光发射，通常用熔融石英，样品池的四壁均光洁透明。对固体样品，通常将样品用石英片固定于样品夹的底部表面，使之与入射光和出射光都成45°夹角放置。
3）单色器
荧光分光光度计有两个单色器：激发单色器和发射单色器。单色器一般为光栅和干涉滤光片；滤光片可分为玻璃滤光片、胶膜滤光片和干涉滤光片３种。
4）检测器
一般为光电管或光电倍增管检测器，二极管阵列检测器、电荷耦合器件阵列检测器（CCD）以及光子计数器等。
仪器的使用方法
一、开机方法：
开启仪器主机电源，按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（power）。同时，观察主机正面面板右侧的XE LAMP和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色。
双击桌面图标。主机进行初始化，扫描界面自动进入。
初始化结束后，须预热15~20分钟。
二、测试
点击扫描界面右侧的“Method”
在“general”选项中的“Measurement”选择测量模式。
Wave length scan波长扫描模式（定性）：研究不同因素（浓度、温度等）环境对荧光物质荧光强度（或波长）的影响；
Time scan 时间扫描模式：测定荧光物质的荧光强度随时间的变化；
Photometry光度计法模式（定量）：光度测定，定量实验；
3-D scan 3D扫描模式：确定未知荧光物质的最适激发波长和发射波长。
3）在“instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数
主要参数选项包括：
选择扫描模式“Scan Mode”
Emission/Excitation/Synchronous（发射光谱、激发光谱和同步光谱）
选择数据模式“Data Mode”：
Fluorescence/Phosphprescence/luminescence(荧光测量，磷光测量，化学发光)
扫描荧光激发光谱：需设定激发光的起始/终止波长和荧光发射光谱。
扫描荧光发射光谱：需设定发射光的起始/终止波长和荧光激发光谱。
激发光终止与起始波长差不小于10 nm。
选择扫描速度（通常1200 nm/min）
选择光电倍增管高压“PMT voltage”（不要超过700 V）
选择仪器响应时间“response”（一般选自动）
选择光闸控制打?，仪器在光谱扫描时自动开启。
选择Report设定数据输出数据信息，仪器采集数据的步长。（通常0.2 nm）及输出数据的起始和终止波长。
Data strat / End 需与“Instrument”选项中设置一致。
设置文件存储路径。
1）点击界面右侧“sample”
2）样品命名“sample name”
3）auto file 点击?可以保存原始文件和TXT格式文本文档数据。
4）参数设置后，点击OK。
扫描测试
打开盖子，放入待测样品后，盖上盖子。
点击扫描界面右侧“measure”，窗口在线出现扫描谱图。
三、关机顺序
1）关闭软件。选中“close the lamp, then close the monitor windows”
点击“Yes”。窗口自动关闭，同时观察主机正面面板的Xelamp指示灯暗下来，而run指示灯仍显示绿色。
2）约10分钟后，关闭仪器主机电源，按下仪器主机左侧面下方的黑色按钮。
关闭计算机。（充分散热）
荧光比色皿的使用时的注意事项：
拿取比色皿时，用手接触棱角位置，避免接触光学面。同时注意轻拿轻放，防止外力对比色皿的影响，产生应力后破损。
凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液(特别是碱性物质)不得长期盛放在比色皿中。
不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤。
比色皿不可用碱液洗涤，也不能用硬布、毛刷刷洗。
不得将比色皿的透光面与硬物或脏物接触。盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附，然后再用镜头纸或丝绸擦拭。
比色皿的洗涤方法
比如测定溶液是酸，如果不干净，就用弱碱溶液洗，要是测定溶液是碱，如果不干净，就用弱酸溶液洗，要是测定溶液是有机物质，如果不干净，就用有机溶剂，比如酒精等溶液洗。
比色皿不可用碱液洗涤，也不能用硬布、毛刷刷洗。
黑壁微量石英比色皿，因其材质的不一致，尤其要注意不能放在酒精里浸泡，用完后，可以立即用棉球或擦镜纸沾酒精清洗，晾干，然后存放于干净的容器或盒子中备用。
文案/杨健宇 美编/张 璇
校核/张 璇 责编/陈明丽
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