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RNA的提取方法是什么?

1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速离心后取上清,所得DNA大小为100-150kb2、甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

3、玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

4、异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)

5、表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。

6、加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。

7、碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。扩展资料:DNA提取原则:

1、保证核酸一级结构的完整性;

2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;

3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;

4、其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。

延伸阅读

RNA提取步骤是什么?

基于我在读研阶段收集组织标本并从中提取RNA的经验,在术中切除的组织需要立即放入RNA保护液并液氮保存,之后用trizol法液氮研磨提取,基本能保证比较好的RNA质量,如果样本离体以后没有及时置入液氮,则很难保证RNA的质量,你应该知道内源性RNA酶是什么,石蜡切片样本做做免疫组化还可以,提取RNA有点太困难了,一般来说芯片都是用新鲜组织或者细胞做的,从石蜡切片里做能不能有结果另说,肯定会有reviewer质疑的

RNA提取原理?

RNA抽取一般使用Trizol法抽提: Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。 Trizol作用原理: 在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。 水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

RNA提取方法有哪些?

RNA提取方法或技术有哪些
通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。

RNA提取问题?

RNA提取步骤及注意事项(仅供参考):实验步骤如下:

1.取50—100mg的组织,加入1mlTrizol试剂,用匀浆器打匀(Trizol先放于冰上)。

2.将匀浆室温放置5min。

3.加入200μl氯仿,剧烈震荡混匀30s,冰上静置3min。

4.12000rpm,4℃离心15min。

5.将上清液小心转移到新的1.5ml离心管中(取400μl),加入等量体积的异丙醇,上下颠倒几次混匀,室温下放置15min。(此步中注意:不要吸取任何中间层物质,宁缺勿烂。)6.12000rpm,4℃离心15min。7.小心移去上清液,防止RNA沉淀丢失。8.用70%乙醇(DEPC处理的水配制)洗涤1次,加入700μl乙醇,将RNA沉淀弹起,漂洗。(此时RNA是不溶解的)9.8000rpm,室温离心10min。10.尽可能彻底地吸走上清,防止RNA沉淀丢失。11.真空离心干燥3—5分钟,或放在室温下使乙醇完全挥发掉。12.沉淀用30μlDEPC-H2O溶解。如发现沉淀难溶,68℃处理10min。13.RNA检测(1)测定样品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/mlRNA计算RNA的产量。OD260/OD280在1.8-2.0。(2)进行甲醛变性琼脂糖凝胶电泳,确定RNA的完整性和污染情况。注意事项:1.获得RNA效率低有一下原因a:样品裂解或匀浆处理不彻底b:最后得到地RNA沉淀未完全溶解2.A260/A280<1.65原因a:检测吸光度时,RNA样品不是溶于TE,而是溶于水。低离子浓度和低PH条件下,A280值会较高b:样品匀浆时加地试剂量太少c:匀浆后样品未在室温放置2分钟d:水相中混有有机相e:最后得到地RNA沉淀未完全溶解3.RNA降解原因a:组织取出后没有马上处理或冷冻b:样品或提取地RNA沉淀保存于-5–20度,未在-60–70度保存c:细胞在胰酶处理时被破坏d:溶液或离心管未经RBase去处理

提取制备RNA常用的方法有哪几种?

常见的RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、异硫氢酸胍法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、TRIZOL试剂快速提取法。RNA提取时,就变性剂的选择来说,CTAB(CTAB法)比异硫氰酸胍(RIZOL试剂法)和 SDS(改良热硼酸法)更有效;就CTAB法来说,由于以CTAB为变性剂,同时加入PVP和β一巯基乙醇共同作用变性蛋白、抑制RNase的活性,使用无水乙醇或异丙醇沉淀杂蛋白和总核酸等,然后再选择性地分离出RNA。

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